不依赖 CAR 的 TCR 依赖性杀伤模型：抗原特异性 T 细胞（OT-1）或多克隆激活的 CD8⁺ CTL 与肿瘤细胞共培养，评价 TCR 信号介导的杀伤与细胞因子释放——肿瘤免疫原性评估与免疫药物筛选的标准工具。
两种共培养模型的选择
抗原特异性模型：OT-1 转基因小鼠来源的 CD8⁺ T 细胞，其 TCR 特异识别 OVA₂₅₇₋₂₆₄（SIINFEKL）/H-2Kᵇ 复合物，与表达 OVA 的肿瘤细胞（如 MC38-luci-OVA）共培养即构成生理性的 TCR-MHC 识别体系，适合研究抗原呈递效率、免疫原性与免疫逃逸机制。
多克隆模型：以 anti-CD3/CD28 磁珠（AM2001）激活的小鼠 CD8⁺ T 细胞作为通用 CTL，与肿瘤细胞共培养建立非特异杀伤模型，体系简单、通量高，适合药物初筛。两种模型互补：多克隆模型回答"T 细胞能否杀伤"，抗原特异模型回答"识别是否特异"。
实验流程与检测
效应细胞制备：OT-1 T 细胞（可直接采购或经 OVA 肽段再刺激扩增）或 EasyIso™ 小鼠 CD8 分选（SN4103）+ AM2001 激活 2-3 天获得 CTL。靶细胞以 MC38-luci-OVA（CL009，萤光素酶+OVA 双标记）为标准配置。
共培养与读出：按 1:1~10:1 效靶比共培养 4-24 小时，萤光素酶活性变化计算杀伤率；上清做 IFN-γ、颗粒酶 B ELISA 反映效应功能；平行设置 OVA 阴性肿瘤细胞（MC38-luci，CL011）作为特异性对照。检查点抑制剂、细胞因子等免疫调节药物可在共培养体系中直接加入评价。
应用场景
肿瘤新抗原/疫苗免疫原性快速筛查：候选抗原肽致敏 APC 后与 T 细胞共培养，以杀伤与 IFN-γ 释放为读出；免疫检查点药物（anti-PD-1/PD-L1）体外功能评价；T 细胞耗竭模型：长时间抗原暴露后检测杀伤与细胞因子衰减，评价逆转耗竭策略。
- 抗原特异模型：OT-1 T 细胞（YD01，OVA 特异性）+ MC38-luci-OVA（CL009，OVA 萤光素酶双标记）
- 多克隆模型：小鼠 CD8⁺ T 分选（SN4103）→ AM2001 激活 → 与 MC38-luci（CL011）共培养
- 检测：萤光素酶定量杀伤、LDH 释放、IFN-γ/颗粒酶 B ELISA
- 小鼠 CD8/naive CD4 T 分离服务（YD04/YD05）可代做分选
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常见问题
OT-1 共培养模型与 CAR-T 杀伤模型有什么区别？
OT-1 是 MHC 限制的生理性 TCR 识别：靶细胞必须呈递 SIINFEKL/H-2Kᵇ，杀伤依赖抗原加工与 MHC 表达，适合研究免疫原性与抗原呈递；CAR 识别表面完整抗原、不依赖 MHC。研究肿瘤 MHC 下调逃逸应选 OT-1 模型，研究 CAR 疗法本身则用 CAR-T 模型。
读出方法如何选择？
萤光素酶最灵敏且可连续定量，适合杀伤曲线；LDH 通用但需扣背景；IFN-γ/颗粒酶 B ELISA 反映效应功能而非直接杀伤。建议杀伤率（萤光素酶）+ 功能因子（ELISA）组合呈现，既有杀伤证据又有机制信息。