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当研究需要把 T 细胞"清走"而非"取出"——富集非 T 群体、构建免疫缺陷背景、体外 GVHD 与移植研究——EasyDep™ 去除体系以生物素化抗体 + 链霉亲和素磁珠温和高效地移除 CD3/CD4/CD8 阳性细胞。

去除(Depletion)与分选(Isolation)的关系

去除与阴选分选共享同一物理原理:磁珠标记"不要的细胞",磁极吸附移除,目的细胞留存上清。差别在于目标:分选强调回收某一特定亚群(如 CD3⁺ T 细胞纯度),去除强调把某一亚群压到尽可能低(如 CD3⁺ 残留 <5%),回收的上清是"其余全部细胞"。

因此去除体系的设计取向是标记覆盖率高、非特异损失低:目的细胞完全不接触抗体与磁珠,回收率与功能状态不受影响——这也是去除后的群体可直接进入下游功能实验的原因。

典型应用场景

① 富集非 T 群体:从 PBMC 或肿瘤消化样本中去除 CD3⁺ T 细胞,研究 NK/巨噬/DC 等群体的构成与功能;② 免疫重建与移植研究:去除 T 细胞的造血干细胞移植研究 T 细冠 GVHD 的贡献,体外共培养模型亦常需去除体系预处理;③ 分级去除:依次或组合去除 CD4/CD8 亚群,解析亚群功能贡献;④ 死细胞去除(Dep0001):样本冻融或消化产生的死细胞会非特异吸附磁珠、干扰后续分选,先用死细胞去除试剂盒清理可显著提高下游分选纯度。

操作要点

标准流程:生物素化抗体与细胞孵育(4-8℃,15-30 分钟)→ 加入链霉亲和素磁珠结合 → 磁极吸附 2-5 分钟 → 回收上清即得去除后群体。去除效率通常 >95%(视样本状态与抗体用量);体积较大时选用 15mL/50mL 规格磁极。去除效率验证:前后取少量细胞流式检测 CD3(或目标标志)残留比例。

  • 人 CD3/CD4/CD8 去除:Dep3001/Dep3002/Dep3003(EasyDep™ depletion kit)
  • 原理:目标亚群被磁珠标记后磁吸去除,目的细胞不接触磁珠直接回收
  • 通用去除平台:EasyIso™ 阴选体系 + 磁极(5mL/15mL/50mL 多规格)
  • 死细胞污染样本可先用 EasyDep™ 死细胞去除(Dep0001)预处理

常见问题

去除效率如何验证?

去除前后各取少量细胞,以流式检测目标标志(如 CD3)阳性率:去除后残留通常 <5%。同时以细胞计数与活力评估回收率。若残留偏高,可加大抗体/磁珠用量或做二次去除。

可以同时去除多种细胞类型吗?

可以。将多种生物素化抗体混合(cocktail)同时孵育,再加链霉亲和素磁珠一次性去除多个亚群;需注意各抗体的总量与磁珠配比,必要时分步去除以获得更干净的背景。

去除后的细胞还能做后续分选吗?

可以,且常作为预处理步骤:先去除占比高或干扰大的群体(如死细胞、T 细胞),再对目标亚群做阴选/阳选,最终纯度与得率都更好。EasyDep™ 体系间试剂相互兼容,可直接串联。

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