调节性 T 细胞（Treg）以 CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ 为特征，是免疫耐受与肿瘤免疫的关键负调控者。本页从 Treg 生物学、体外诱导三要素到验证与功能检测，给出完整的 iTreg 极化实验方案。
Treg 生物学：天然 Treg 与诱导 Treg
调节性 T 细胞存在两大来源：胸腺发育的自然 Treg（nTreg/tTreg，经自身抗原亲和筛选产生）与外周诱导的 iTreg/pTreg（naive CD4⁺ T 在 TGF-β 等耐受性细胞因子环境下分化而来）。两者均以转录因子 FoxP3 为核心标志——FoxP3 缺陷在人类导致 IPEX 综合征、在小鼠导致 scurfy 表型，充分说明其在免疫稳态中的中枢地位。
Treg 的效应机制包括：分泌 IL-10、TGF-β 等抑制性细胞因子；通过 CTLA-4 接触性抑制 APC 功能；高表达 IL-2Rα（CD25）竞争性消耗环境中 IL-2，限制效应 T 细胞扩增。在自身免疫、移植耐受、抗肿瘤免疫（负向调控）等研究中，体外诱导获得功能性 iTreg 是常用手段。
体外诱导体系的三要素
成功 iTreg 诱导依赖三个环节的严密配合：① 前体细胞——naive CD4⁺CD25⁻ T 或 Tconv 必须经无柱阴选获得，保持真正静息状态，任何预激活都会使极化偏离；② 激活——anti-CD3/CD28 提供的 TCR + 共刺激信号启动 T 细胞（信号强度需温和，过强刺激偏向效应分化）；③ 极化因子——TGF-β 驱动 FoxP3 表达，IL-2 是 FoxP3 维持与 Treg 扩增的必需因子，同时以 anti-IL-4 中和抗体阻断 Th2 偏离。
英诺思 EasyTune™ 小鼠 Treg 诱导分化试剂盒（DM101）将上述细胞因子与中和抗体预配为即用型体系，避免各组分单独称量带来的批次波动，提高诱导可重复性。
表型验证与功能检测
表型验证以流式为核心：CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ 三重染色（FoxP3 为胞内/核内抗原，需固定破膜），并同时检查 CD127^low 等辅助标志。功能验证采用经典共培养抑制实验：将诱导的 Treg 与 CFSE 标记的 responder T 细胞按 1:1 至 1:4 比例共培养，以对 responder 增殖的抑制率量化 Treg 功能；上清 IL-10/TGF-β 的 ELISA 检测可作为分泌功能的补充证据。
- 前体选择：Tconv（SN4106）或 naive CD4（SN3104/SN4104），阴选获得未激活状态
- 诱导体系：TGF-β（CTK302）+ IL-2（CTK301/CTK401）+ anti-IL-4 中和（阻断 Th2 偏向）
- 验证指标：CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ 比例（流式）与 IL-10/TGF-β 分泌
- 人源 Treg 诱导可联系英诺思定制方案
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常见问题
为什么 Treg 诱导的前体细胞必须用阴选？
iTreg 诱导对前体状态极其敏感。阳选磁珠结合 CD4/CD25 等表面分子后可能阻断表位、或通过抗体交联诱导预激活信号，使细胞在进入极化体系前已偏离静息状态，导致 FoxP3 诱导效率下降与批次不稳定。无柱阴选的前体（如 SN4106 分选的 Tconv）全程不接触磁珠，是诱导实验的推荐起点。
iTreg 的诱导效率一般能达到多少？
在体系与培养条件合适的情况下，小鼠体系（DM101）诱导后 CD4⁺FoxP3⁺ 比例通常可达 60% 以上，具体受供体个体差异、前体纯度与血清批次影响。若效率显著偏低，建议先核查前体是否静息、TGF-β/IL-2 活性以及激活强度是否过强。
诱导得到的 iTreg 与天然 Treg 功能一样吗？
iTreg 与 nTreg 表型相似（CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺）且均具抑制功能，但稳定性存在差异：小鼠 iTreg 的 FoxP3 表达在某些炎症环境下可逆。功能层面建议以共培养抑制实验为准，不能仅凭 FoxP3 阳性率等同天然 Treg。