在免疫治疗、肿瘤、自免、感染等研究领域，T细胞的体外分离与扩增是关键技术，但进口试剂价格高、操作复杂、货期长等问题常让科研人头疼。今天，英诺思生物（Eynos LifeScience）的国产创新产品，梳理一套高效、稳定、高性价比的实验方案，让新手也能一次就成功！
实验流程概览
血液样本 → 分离PBMC → T细胞分选 → 体外激活 → 扩增培养
核心工具：英诺思EasyIso™系列分选试剂盒 + 英诺思EasyIso™系列FACS buffer + ActBeads™ T细胞激活磁珠 + T细胞专用培养基 —— 仅需 1812元，全套搞定
Step 1. 从全血中分离PBMC
材料：新鲜人外周血、淋巴细胞分离液（如Ficoll、淋巴细胞分离液）、离心管、离心机。
操作步骤：
- 将抗凝血与PBS按1:1稀释，轻轻叠加于淋巴细胞分离液上。
❗本步骤可以将不同人来源的血液混合，进行PBMC分离。
- 水平离心（400×g，20分钟，20℃），离心后可见分层：上层为血浆，中层为淋巴细胞层（PBMC）。
❗调整离心机加速度，以赛默飞离心机为例，加速度为5，减速度为2。
- 吸出PBMC层，用EasyIso™ FACS buffer (#EISO0500) 洗涤2次（400×g，5分钟），重悬于FACS Buffer（含2% FBS的PBS）。
❗无需再使用红细胞裂解液；采用 EasyIso™ FACS buffer可以有效降低细胞损失。
Step 2. 分选高纯度T细胞
以 英诺思EasyIso™ 人类CD3 T细胞分选试剂盒（Catalog SN3101）为例
操作流程：
- 将PBMC浓度调整至1×10⁸ cells/mL。
- 加入分选抗体混合液（100 μL/mL样本），室温孵育10分钟。
- 加入链霉亲和素纳米磁珠（100 μL/mL样本），轻柔混匀后孵育5分钟。
- 加入FACS Buffer至总体积2.5 mL（单孔磁极）或7.5 mL（联排磁极），置于磁力架吸附3-5分钟。
- 倾斜磁力架，将未吸附的细胞悬液（即目标T细胞）转移至新管中。
Step 3. T细胞激活与扩增
推荐产品：英诺思ActBeads™ Human T细胞激活磁珠（Catalog AH2001）
操作流程：
- 将分选的T细胞用专用培养基重悬（推荐密度1×106 cells/mL）。
- 按1:1比例加入ActBeads™磁珠（每1×105 cells使用2.5 μL磁珠），轻柔混匀，加入终浓度为100U/mL的IL2。在37℃、5% CO₂条件下培养，24小时后可见细胞体积增大、表面标志物变化。
- 每隔2-3天补充含IL2（100 U/mL）的T细胞专用培养基，维持扩增。
Step 4. 体外增殖培养与效果验证
- 流式分析T细胞FSC和SSC大小，激活后的T细胞会明显变大。
- 检测T细胞表面marker，激活后的T细胞会高表达CD25, CD69, ICOS, CD71等指标。
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| 产品名称 | 货号 |
|---|---|
| EasyIso™ Human CD3 T cell Isolation Kit | SN3101 |
| EasyIso™ Human CD4 T cell Isolation Kit | SN3102 |
| EasyIso™ Human CD8 T cell Isolation Kit | SN3103 |
| ActBeads™ Human T细胞激活磁珠 | AH2001 |
| 人T淋巴细胞培养基 | C300100 |
| 细胞分选缓冲液（EasyIso Buffer） | EISO0500 |
| Human IL-2 | CTK301 |