EasyIso™ mouse Naive CD4 T cell isolation kits (阴选)

血液、脾脏、淋巴结等细胞亚群比例相对清晰的样本适用于阴选；其他组织里的免疫细胞群会有动态的变化，且比例通常低于5%，都推荐用阳选的

减半使用我们测试过不怎么影响纯度，但是需要老师根据自己的样品测试一下

虽然 T 细胞都表达 CD3，但并不是所有 T 细胞都同时表达 CD4 和 CD8，成熟的 T 细胞只表达其中一种。CD3 T 细胞分选试剂盒、CD4 T 细胞分选试剂盒和 CD8 T 细胞分选试剂盒的区别主要在于以下几个方面：

分选原理：三种试剂盒通常都基于抗原 - 抗体特异性结合的原理，利用磁珠或荧光标记等方法来分选细胞。CD3 T 细胞分选试剂盒是针对所有表达 CD3 的 T 细胞，通过识别 CD3 抗原进行分选。CD4 T 细胞分选试剂盒则是特异性识别并结合 CD4 抗原，从而分离出表达 CD4 的 T 细胞亚群。CD8 T 细胞分选试剂盒同理，是通过识别 CD8 抗原，将表达 CD8 的 T 细胞分选出来。
分选细胞类型：
CD3 T 细胞分选试剂盒会将所有 T 细胞（包括 CD4+T 细胞、CD8+T 细胞等）都分选出来，因为所有 T 细胞表面均表达 CD3 分子。

CD4 T 细胞分选试剂盒主要用于分离辅助性 T 细胞（Th 细胞），它们在免疫反应中起辅助作用，可帮助激活 B 细胞、细胞毒性 T 细胞等。

CD8 T 细胞分选试剂盒主要用于分离细胞毒性 T 细胞（Tc 细胞）  Cytotoxic T cell，它们能够直接杀伤被病原体感染的细胞或肿瘤细胞等。

应用场景：
CD3 T 细胞分选试剂盒常用于需要研究整体 T 细胞功能或特性的实验，如研究 T 细胞在免疫应答中的总体作用等。
CD4 T 细胞分选试剂盒适用于研究与免疫辅助功能相关的课题，如探讨 Th 细胞亚群在过敏反应、自身免疫病中的作用等。
CD8 T 细胞分选试剂盒则更多应用于肿瘤免疫治疗研究，如评估细胞毒性 T 细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，或用于 CAR - T 细胞疗法中制备针对肿瘤细胞的特异性杀伤细胞等。

英诺思生物细胞分选试剂盒分成大中小三个规格，最大上样量是1e+9，5e+8，1e+8，具体分选剂量查看对应的货号。能够得到多少细胞主要看目的细胞的占比，比例越高，得到的细胞数量越多。一般而言，阴选试剂盒的得率低于阳选试剂盒。

小鼠C57B6/L或者BalB/C都可以的，一般没有年龄要求，但是推荐6-8周，小鼠比较年轻，性别没有要求（正常我们用的B6背景，一般选6-8周(如果要培养扩增)，性别无明显差异）
C57BL/6（B6）= 细胞免疫 / Th1/CD8 杀伤 / 肿瘤 / 基因编辑标准小鼠；
BALB/c = 体液免疫 / Th2 / 过敏 / 抗体制备专用小鼠；
若你实验是小鼠 naive CD8 T 体外活化、CFSE 增殖、IL-2/7/15 联合扩增，优先使用 C57BL/6

人PBMC：T细胞60-70%(CD4 30-40%,CD8 15-25%)，B细胞5-15%，NK 5-10%，单核细胞10-20%，DC 0.5-2%。小鼠脾脏(C57BL/6)：B细胞50-65%，T细胞20-35%(CD4 15-25%,CD8 8-15%)，NK 1-2%，DC 1-3%。比例因个体、年龄、品系而异。

naive CD4的得率取决于小鼠的状态，小鼠有炎症的话，naive CD4 的比例会降低，最终得到的细胞数量会少。
按照公式：得到的细胞数/（naive CD4 T百分比*总的细胞数），我们是纯度大于90%，得率大概40-60%。
建议老师分选前流式测一下 CD44和CD62L的表达，如果分选前naive CD4 T就不多，那么肯定分不出来多少

无钙镁 PBS 提供渗透压与 pH；BSA/FBS 防吸附、封闭 Fc、保护细胞；EDTA 螯合离子打散细胞团，三者搭配实现高纯度、高活率免疫细胞阴性分选。
EISO0500配方: NaCI136.89 mM; KCI 2.67 mM; Na2HPO4 8.1 mM; KH2PO4 1.76 mM; FBS 2%; EDTA 0.02%

有的，我们提供的小鼠CD62L阳选磁珠可以配合CD4或者CD8阴选的试剂盒，将CD62L细胞阳选出来（主要是CD44-CD62L+的naive T），同时留下的主要是CD44+CD62L-的细胞

阴选是将非目前细胞去除，得到的目的细胞里不含有磁珠；阳选是通过磁珠将目的细胞拉出来，会含有磁珠。英诺思生物阳选产品里的磁珠粒径非常小，约50nm，对细胞功能没有影响，回输小鼠也不会造成伤害

小鼠脾脏(C57BL/6,6-8周)：B细胞(B220+)50-65%，T细胞(CD3+)20-35%(CD4 15-25%,CD8 8-15%)，NK 1-2%，DC 1-3%，巨噬细胞1-2%，粒细胞1-2%。BALB/c品系B细胞比例更高、Th2偏向。每只脾脏约0.8-1.5×10⁸细胞。

naive CD4分选是在CD4的基础上，去除了记忆T细胞，Treg等，得率会低一些。
一般而言，单次分选的细胞量应该大于4e7会比较好，不然得到的细胞就太少了。
另外一个是要看一下小鼠分选前脾脏naive CD4（CD4+CD62L+CD44-）的比例，因为这一群细胞的比例波动会比较大一些，如果这一群细胞一开始就比较少，往往得到的也会有点少