英诺思生物推出小鼠 CD49b 阳选纳米磁珠试剂盒 anti-mouse CD49b Nanobeads（货号 PM049B）：以抗小鼠 CD49b 抗体直接偶联纳米磁珠，经有柱磁分选获得 CD49b⁺ 细胞，或收集流穿液获得去除 CD49b⁺ 细胞的阴性组分——一套流程兼容阳性分选与阴性去除两种用途。
小鼠脾脏样本的验证结果为：分选前 CD49b⁺ 细胞占比 3.54%，一次有柱阳选后阳性组分纯度 87.6%，流穿液中 CD49b⁺ 细胞残留 1.28%。本文给出 CD49b 的生物学背景、产品设计、完整验证数据与流式原始图、规格参数与操作要点。
小鼠脾脏：分选前 CD49b⁺ 3.54% → 阳选产物 87.6%（24.7 倍富集）→ 流穿液残留 1.28%（相对去除 63.8% 的 CD49b⁺ 细胞）。
操作条件：细胞悬液 1×10⁸ cells/mL，磁珠 100 μL/mL 悬液，4 °C 孵育 10 min，有柱阳选（M 柱 / L 柱，配套磁力架 M1/M8、L1/L4）。
数据来源：英诺思生物内部验证实验，小鼠脾脏单样本，一次有柱阳选；非客户反馈、非第三方平行比对。
一、CD49b 与小鼠 NK 细胞：为什么值得单独做一支磁珠
CD49b 是分子量约 150 kD 的整合素 α 链（α2 整合素、VLA-2 α 链）。它与 CD29（β1 整合素）非共价结合形成 VLA-2（α2β1 整合素），是胶原与层粘连蛋白的受体。在免疫学研究中，CD49b 更常以它的克隆号 DX5 被提及。
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 别名 | α2 整合素、VLA-2 α 链、整合素 α2 链（流式常用克隆号 DX5） |
| 分子量 | 约 150 kD |
| 蛋白类型 | 整合素 α 链 |
| 二聚体形式 | 与 CD29（β1 整合素）非共价结合组成 VLA-2 |
| 配体 | 胶原、层粘连蛋白 |
| 主要表达细胞 | 血小板、大多数 NK 细胞、NKT 细胞、部分 CD8+ T 细胞亚群 |
在小鼠外周淋巴器官中，CD49b⁺ 细胞群体以 NK 细胞为主体，因此 CD49b 长期被用作小鼠 NK 细胞的鉴定与分选标志。与 NK1.1 相比，CD49b（DX5）在更多小鼠品系中稳定表达，做跨品系比较实验时更省心——这也是它在 NK 细胞研究中被广泛采用的原因。
它的研究价值集中在三处：
- NK 细胞获取的常用入口：脾脏、骨髓、肿瘤浸润组织中 CD49b⁺ 细胞的分离，是细胞毒性实验、脱颗粒检测、IFN-γ 产生等功能实验的起点；
- 固有免疫的效应环节：NK 细胞通过细胞毒性颗粒与细胞因子参与抗肿瘤、抗感染应答，是肿瘤免疫研究的核心效应细胞之一；
- 多亚群共表达的分析对象：NKT 细胞与部分 CD8+ T 细胞亚群同样表达 CD49b，结合 TCR、NK1.1 等标志可区分亚群——这一点同时决定了分选后多色流式验证的设计。
典型应用覆盖 NK 细胞功能研究、肿瘤免疫（浸润与活化状态分析、NK-肿瘤细胞共培养）、感染免疫、CD49b⁺ 细胞去除（研究 NK 缺失条件下其他免疫细胞的行为）、NKT 与 CD8+ T 亚群定义，以及 scRNA-seq／ATAC-seq 的起始样本制备。这些应用的共同前提是：拿到纯度足够、且状态没被破坏的 CD49b⁺ 细胞，或者拿到去除得足够干净的阴性组分。
二、产品设计：抗体直接偶联纳米磁珠，一套流程两种用途
PM049B 的技术路线是抗体直接偶联纳米磁珠，而不是「生物素化抗体 + 链霉亲和素磁珠」的两步法。这一选择带来三个直接结果：
- 操作只有一步标记：抗体与磁珠一体化，单细胞悬液加磁珠、4 °C 孵育 10 min 即完成标记，不需要额外的抗体孵育与洗涤轮次；
- 磁珠占据的抗原表位有限：纳米级磁珠（粒径约 50 nm）只占据约 20%~30% 的抗原表位，不影响后续流式染色，也不需要为分选产物挑选特定克隆号的流式抗体——这对需要多色 panel 验证分选结果的研究很关键；
- 不影响细胞后续功能：磁珠结合温和，分选所得细胞可直接进入功能实验、共培养体系与单细胞建库流程。
流程的第二步是有柱磁分选：样本上柱后置于磁场中，被磁珠标记的 CD49b⁺ 细胞滞留于柱内，其余细胞随重力流出；将分选柱移出磁场、加缓冲液并用柱塞推压洗脱，即得 CD49b⁺ 细胞。
「去除 CD49b⁺ 细胞」这件事不需要额外买一支试剂盒：上样与洗涤阶段的流穿液本身就是阴性组分。对研究「NK 细胞缺失条件下其他免疫细胞如何反应」的实验，这等于一次操作拿到两个可用群体——本次验证中该组分的 CD49b⁺ 残留为 1.28%。
三、试剂盒规格、配套与剂量
| 项目 | 内容 |
|---|---|
| 产品名称 | Anti-mouse CD49b Nanobeads |
| 靶标 | 小鼠 CD49b（α2 整合素 / VLA-2 α 链，DX5） |
| 存储条件 | 4 °C 保存，避免冷冻 |
| 缓冲液成分 | PBS + 0.1% BSA |
| 功能 | 特异性识别并结合 CD49b⁺ 细胞，通过有柱磁分选获得／去除 CD49b⁺ 细胞 |
| 说明书版本 | v26.02（2026-10 更新，修正数据图注中的货号标注） |
| 货号 | 处理细胞数 |
|---|---|
| PM049BS | 2×108 cells |
| PM049BM | 1×109 cells |
| PM049BL | 2×109 cells |
| 项目 | 推荐配置 |
|---|---|
| 缓冲液 | FACS Buffer（1× PBS + 0.02% EDTA + 2% FBS）；建议采用英诺思分选 Buffer——缓冲液品质对细胞活性影响较大 |
| 耗材 | 70 μm 无菌尼龙滤网、分选柱（M 柱／L 柱） |
| 仪器 | 离心机、磁力架 M1/M8 或 L1/L4 |
磁珠剂量
细胞悬液浓度 1×108 cells/mL
磁珠用量 100 μL / mL 细胞悬液
换算 即 10 μL / 1×107 cells
分选柱载量
M 柱 <1×107 标记细胞 / <2×108 总细胞；磁极 M1/M8；平衡液 500 μL，洗涤 3×500 μL
L 柱 <1×108 标记细胞 / <2×109 总细胞；磁极 L1/L4；平衡液 3 mL，洗涤 3×3 mL
一只小鼠脾脏的总细胞数一般为 0.5–1×108，按 3.54% 的 CD49b⁺ 占比计，单个脾脏可获得数万个 CD49b⁺ 细胞的量级——选柱时按总细胞数落位，M 柱即可覆盖单只脾脏，多只脾脏合并时再考虑 L 柱。
四、小鼠脾脏实测：3.54% → 87.6%，流穿残留 1.28%
验证方法：取小鼠脾脏制备单细胞悬液，裂解红细胞后计数，按 1×108 cells/mL 重悬；按 100 μL/mL 加入 anti-mouse CD49b Nanobeads，4 °C 孵育 10 min；洗涤后经有柱阳选，分别收集洗脱的阳性组分与上样/洗涤阶段的流穿液，以 CD49b 抗体染色后做流式分析。
| 检测项目 | 数值 |
|---|---|
| 分选前 CD49b⁺ 细胞占比（小鼠脾脏） | 3.54% |
| 分选后 CD49b⁺ 细胞纯度（阳性组分） | 87.6% |
| 流穿液中 CD49b⁺ 细胞残留（阴性组分） | 1.28% |
五、结果解读：87.6% 与 1.28% 分别意味着什么
先说富集倍数。3.54% → 87.6%，相当于把 CD49b⁺ 细胞在总群体中的占比提高了约 24.7 倍。这个量级足以支撑 NK 细胞的功能实验：细胞毒性、脱颗粒、IFN-γ 分泌这类读出，对「靶细胞占比」的敏感度远高于对个别污染亚群的敏感度。
再说剩下那 12.4%。它不是污染意义上的「脏」，而是 CD49b 这个标志本身的生物学外延——NKT 细胞与部分 CD8+ T 细胞亚群同样表达 CD49b。也就是说，87.6% 的群体是「CD49b⁺ 细胞」，其中以 NK 细胞为主体，但包含 NKT 与部分 CD8+ T。若下游研究需要严格意义上的纯 NK 细胞，分选后应结合 TCRβ、NK1.1、CD3 等标志做多色验证并做二次纯化，而不是直接把这个数字当作 NK 细胞纯度。
流穿液的 1.28% 同样值得看。对「去除 CD49b⁺ 细胞」的用途，关键指标是阴性组分里还残留多少目标细胞——1.28% 意味着相对去除率约 63.8%（以分选前 3.54% 为基准）。这个水平适合研究 NK 细胞缺失条件下的整体免疫应答变化；但如果实验对「绝对无 NK 细胞」有硬要求（例如过继转移前的宿主预处理），建议加一次重复过柱，或在流式上做进一步排除。
阳性组分：CD49b⁺ 纯度 87.6%，可用于 NK 细胞功能实验、共培养、scRNA-seq 起始样本。
阴性组分：CD49b⁺ 残留 1.28%，可作为「NK 细胞去除」的对照群体，用于比较缺失条件下的其他免疫细胞行为。
不承诺的部分：本次为单样本单次分选，未做多批次统计，也未测量细胞得率（无原始计数的绝对回收数据）——不做得率换算，不使用「%Total 反推回收率」。
六、操作要点：七步完成一次有柱阳选
需要继续往下走时，可衔接英诺思 AH2001 T 细胞激活磁珠、C400100 小鼠 T 淋巴细胞培养基、EISO0500 细胞分选缓冲液 等配套试剂。
七、使用注意事项
- CD49b 的表达范围要写进分析设计：CD49b 亦表达于 NKT 细胞与部分 CD8+ T 细胞亚群。若以纯 NK 细胞为研究对象，分选后需结合 TCR、NK1.1 等标志做多色流式验证。
- 不同组织来源纯度会有差异：本次验证样本为小鼠脾脏（87.6%）。骨髓、肿瘤浸润组织、肺等来源的 CD49b⁺ 起始比例与细胞状态不同，实际分选纯度会变化，不要跨组织直接套用这个数字。
- 磁珠用量按说明书执行：1×108 cells/mL 时按 100 μL/mL 添加（即 10 μL / 1×107 cells），孵育条件为 4 °C、10 min，不要为了「更纯」而加量——加量只会增加非特异结合与细胞损伤。
- 低比例样本可二次纯化：CD49b⁺ 比例低的样本（如肿瘤浸润组织），换新柱重复一遍可获得更高纯度，代价是得率下降。
- 用 FACS Buffer，不要用纯 PBS：PBS 缺乏蛋白保护与渗透压缓冲能力，会损伤得率与活性；建议采用英诺思分选 Buffer。
- 分选柱与磁极必须配对：M 柱配 M1/M8，L 柱配 L1/L4；上样前润洗，洗涤时待柱内液体完全流空再加下一次。
- 流式染色要按细胞总数足量加抗体：分选产物的目标细胞密度显著高于分选前样本，抗体剂量不足会直接影响纯度判读——这是「分选很好但流式图不好看」的常见原因。
- 全程无菌操作；本产品仅供科研使用，不用于临床诊断或治疗。
八、产品体系位置、说明书更新与常见问题
PM049B 属于英诺思生物有柱阳选磁珠（PM 系列，小鼠），与 anti-mouse CD4（PM004）、anti-mouse CD8（PM008）、anti-mouse CD11b（PM011B）、anti-mouse CD11c（PM011C）、anti-mouse CD45（PM045）、anti-mouse CD117（PM117）、anti-mouse F4/80（PM480）、anti-mouse Ly-6G（PM801）共同构成小鼠细胞分选产品体系；同一技术路线的人源产品（PH 系列）与通用型产品（PG 系列）覆盖其他种属与通用标记需求。
| 货号 | 产品名称 | 用途 |
|---|---|---|
| PM049B | anti-mouse CD49b Nanobeads | 小鼠 NK 细胞（CD49b⁺）分选与去除 |
| PM045 | anti-mouse CD45 Nanobeads | 小鼠白细胞分选与去除 |
| PM011C | anti-mouse CD11c Nanobeads | 小鼠树突状细胞分选 |
| PM011B | anti-mouse CD11b Nanobeads | 小鼠髓系细胞分选 |
| PM480 | anti-mouse F4/80 Nanobeads | 小鼠巨噬细胞分选与去除 |
| PM801 | anti-mouse Ly-6G Nanobeads | 小鼠中性粒细胞分选与去除 |
常见问题
Q1：87.6% 是 NK 细胞纯度吗？
不是。87.6% 是 CD49b⁺ 细胞纯度，其中以 NK 细胞为主体，但包含同样表达 CD49b 的 NKT 与部分 CD8+ T 细胞。需要严格的 NK 纯度时，应在分选后做 TCRβ／NK1.1 等多色验证。
Q2：为什么不用阴选？
阴选不标记目标细胞表面，适合对表面标志完整性有要求的场景；阳选流程更短（一步标记 + 一次过柱），且能顺带拿到流穿液作为阴性组分。以 CD49b⁺ 细胞本身为研究对象、或需要去除 CD49b⁺ 细胞时，阳选更直接。英诺思同时提供阴选路线，可按下游需求选择。
Q3：分选后细胞还能做流式吗？磁珠会不会干扰？
可以。纳米磁珠只占据约 20%~30% 的抗原表位，不影响流式染色，也无需为分选产物挑选特定克隆号抗体。
Q4：一只小鼠脾脏需要多大的规格？
单只小鼠脾脏总细胞数一般 0.5–1×108，PM049BS（2×108 cells）即可覆盖数只脾脏的单次实验；常规课题组批量实验推荐 PM049BM。