Gr-1是一个独立的分子吗？

不是。Gr-1（granulocyte receptor-1）是单克隆抗体RB6-8C5识别的抗原名，其表位同时存在于Ly6G和Ly6C两种蛋白上，本质上是两者的合称。Gr-1不是某个基因的产物，也没有对应的基因敲除小鼠。文献中的Gr-1⁺细胞严格来说是Ly6G阳性或Ly6C阳性的细胞集合。

为什么人的中性粒细胞染不出Ly6G和Ly6C？

人基因组中没有Ly6g、Ly6c1、Ly6c2的直系同源基因——小鼠15号染色体上的Ly6亚簇是两个物种分化后经基因复制产生的。人源MDSC研究采用CD11b、CD14、CD15、CD66b、HLA-DR、LOX-1等标志组合定义，人单核细胞亚群依据CD14与CD16划分。小鼠体系的Gr-1/Ly6G/Ly6C结论不能直接外推到人。

中性粒细胞清除实验应该选哪个抗体？

若研究目标确实是中性粒细胞，建议选用1A8（Ly6G特异性），并将细胞定义为CD45⁺CD11b⁺Ly6G⁺。若使用RB6-8C5，其体内给药会同时清除中性粒细胞和Gr-1⁺单核细胞，结论应表述为清除Gr-1⁺细胞，而不是清除中性粒细胞——经典对照实验显示两者对血浆TNF-α的影响相差约5倍。

RB6-8C5和1A8可以放在同一管流式染色吗？

不建议。1A8与RB6-8C5之间存在结合干扰，两者不宜随意同管使用。相对地，HK1.4（抗Ly6C）不阻断RB6-8C5的结合，适合与RB6-8C5组成多色方案。多色配色前建议核对各克隆的干扰信息并在自身体系中验证。

Gr1、Ly6G和Ly6C有什么区别？

在小鼠髓系细胞研究的抗体清单里，Gr-1、Ly6G 和 Ly6C 几乎从不缺席。它们是流式配色表上的常客，也是论文方法学部分出现频率最高的几个名字之一。

但翻开文献就会发现一个有意思的现象：同一群细胞，有人写 Gr-1⁺，有人写 Ly6G⁺，还有人写 Ly6C⁺。很多人默认这三个名字指的是同一件事——但它们指向的，并不完全是同一批细胞。

更麻烦的是，这种混用不只停留在文字层面。它会直接影响流式设门策略与抗体选型，甚至能让一个「中性粒细胞清除实验」的结论悄悄跑偏。本文从命名、结构、表达谱、抗体克隆与物种差异五个层面，把这三者的关系一次讲清。

本文导读：Gr-1 到底是什么，为什么说它「不是一个分子」｜Ly6G 与 Ly6C 的分子结构与分工差异｜两类分子的表达谱盘点｜同样是「抗 Gr-1」抗体为什么结论可能完全相反｜三个最容易踩的实验坑与一份可直接用的设门建议。

一、Gr-1：一个被抗体「命名」出来的抗原

先说结论：Gr-1 不是一个分子。

Gr-1 的全称是 granulocyte receptor-1（粒细胞受体 1），也叫髓系分化抗原 Gr-1。这个名字最早来自一株大鼠单克隆抗体——RB6-8C5。当年研究者用它标记粒细胞，就把被它识别的那个抗原命名为 Gr-1。

后来真相浮出水面：RB6-8C5 识别的表位，同时存在于 Ly6G 和 Ly6C 两种蛋白上。也就是说，Gr-1 本质上是这两个分子的「合称」。

关键概念：抗原名 ≠ 分子名。由此得出一个重要推论：Gr-1 不是某个基因的产物，也没有对应的基因敲除小鼠。文献里的「Gr-1⁺ 细胞」，严格翻译过来应该是「Ly6G 阳性或 Ly6C 阳性的细胞」——是一个集合，而不是一个定义明确的细胞类型。

名称	性质	对应分子	常见抗体克隆
Gr-1	抗原名（由抗体所定义）	Ly6G 与 Ly6C 的交叉反应表位	RB6-8C5
Ly6G	基因产物（由 Ly6g 编码）	21~25 kDa GPI 锚定糖蛋白	1A8（Ly6G 特异性）
Ly6C	基因产物（由 Ly6c1、Ly6c2 编码）	14~17 kDa GPI 锚定糖蛋白	HK1.4

一句话记住：Gr-1 是「抗体看到的东西」，Ly6G 和 Ly6C 才是「细胞上真实存在的分子」。

二、Ly6G 与 Ly6C：同族兄弟，身世不同

Ly6G 和 Ly6C 同属 Ly6/uPAR 超家族。家族成员共享约 100 个氨基酸的 LU 结构域，三级结构是经典的「三指折叠」，和蛇毒 α-神经毒素、补体调节蛋白 CD59、uPAR 是「远房亲戚」。

两者还有一个共同点，而且这个共同点对实验影响很大——它们都是 GPI（糖基磷脂酰肌醇）锚定蛋白：靠一个 C 端的 GPI 锚「插」在细胞膜外层，没有跨膜段，也没有胞内段。

GPI 锚定意味着什么？这两种蛋白不能直接向细胞内传递信号（已有研究提示它们可以经脂筏结构间接参与信号调节）。对实验的启示有两条：其一，抗原决定簇位于细胞膜外侧，适合活细胞表面染色，不必考虑胞内段设计；其二，膜定位依赖 GPI 锚，对固定、破膜及部分刺激条件较敏感，操作时需保持条件一致。

说到基因层面，还有两个细节值得记住。

第一，小鼠的 Ly6 基因座位于 15 号染色体，跨度约 630 kb，包含至少 18 个基因。大家熟悉的干细胞标志物 Sca-1，其实就是这个家族的 Ly6A/E——也就是说，Sca-1 和 Ly6G、Ly6C 是「同族不同成员」的关系。

第二，Ly6C 蛋白由 Ly6c1 和 Ly6c2 两个高度同源的基因编码。已有研究显示，除髓质胸腺上皮细胞和 CD4 单阳 T 细胞外，多数免疫细胞以 Ly6C2 表达为主。所以「Ly6C」在其编码来源上，本身就不是单一基因产物。

三、表达谱：一个守在中性粒细胞，一个走遍大半个免疫系统

一句话概括：Ly6G 的「社交圈」很窄，Ly6C 的「朋友圈」很广。

Ly6G：中性粒细胞的身份证

成熟中性粒细胞：表达水平最高，标志性最强
骨髓粒系：表达强度与粒细胞分化成熟程度正相关，可用于判断分化阶段
PMN-MDSC：多形核型髓系来源抑制细胞亚群
嗜酸性粒细胞：近年研究显示，小鼠嗜酸性粒细胞在 IL-5 诱导下会上调 Ly6G/Gr-1

Ly6C：免疫系统里的「多面手」

Ly6C 高表达（Ly6C^hi）单核细胞：即经典/炎症型单核细胞，CCR2 依赖，是炎症性巨噬细胞的前体
Ly6C 低表达（Ly6C^lo）单核细胞：即非经典/巡逻型单核细胞，发育依赖转录因子 Nr4a1
浆细胞样树突状细胞（pDC）：常用标志组合组分之一
活化/记忆性 CD8⁺ T 细胞：IFN-α/β 与 poly(I:C) 可上调其表达
其他：部分 NK 细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、内皮细胞、浆细胞与胸腺细胞

品系差异：一个最容易忽略的变量。Ly6C 在 T 细胞上的表达受单倍型影响——Ly6.2 单倍型（如 C57BL/6、DBA/2、SJL、129）的 CD8⁺ 和 CD4⁺ T 细胞均可呈 Ly6C 阳性；Ly6.1 单倍型（如 BALB/c、C3H/He、CBA）仅 CD8⁺ T 细胞呈 Ly6C 阳性。也就是说，C57BL/6 和 BALB/c 的 T 细胞 Ly6C 数据，不能直接拿来对比。

细胞类型	Ly6G	Ly6C
中性粒细胞	+++	+
嗜酸性粒细胞	+（IL-5 诱导，品系相关）	+（品系相关）
Ly6C^hi 单核细胞	−	+++
Ly6C^lo 单核细胞	−	+/−
巨噬细胞亚群	部分 +	部分 +
浆细胞样树突状细胞（pDC）	−	++
记忆性 CD8⁺ T 细胞	−	+（活化/干扰素诱导）
NK 细胞亚群	−	+
内皮细胞	−	+

注：+ 数量表示相对表达强度，仅供横向比较；实际水平受品系、组织来源与活化状态影响，应以自身体系的验证结果为准。

四、抗体克隆：同样「抗 Gr-1」，看到的可能不是同一群细胞

这一节是整篇文章的「分水岭」。三个名字之所以容易被混用，根子就在抗体上。

RB6-8C5：用得最久，也最「不专一」

识别 Ly6G 与 Ly6C 的交叉反应表位，可同时结合中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞，以及部分树突状细胞和淋巴细胞亚群。它是最早、最广泛用于「中性粒细胞清除」的抗体，但特异性有限。

1A8：只认 Ly6G

仅识别 Ly6G，不识别 Ly6C，是目前区分中性粒细胞的首选克隆。流式图上看得很清楚：1A8 阳性群正好对应 RB6-8C5 的强阳性群（Ly6G 阳性的粒细胞）；而 RB6-8C5 弱阳性、1A8 阴性的那一群，主要是 Ly6C 阳性的单核细胞和淋巴细胞。

设门提醒：如果用 RB6-8C5 设门，请务必记住：所圈定的「Gr-1^dim 群」，并不是粒细胞。

HK1.4：认 Ly6C，还能和 RB6-8C5 同框

识别 Ly6C，且不阻断 RB6-8C5 的结合，因此适合多色方案组合。相对地，1A8 与 RB6-8C5 之间存在结合干扰，两者不宜随意放在同一管里。

抗体克隆	识别对象	多色方案兼容性
RB6-8C5	Ly6G + Ly6C（交叉反应）	与 HK1.4 可共用；与 1A8 存在干扰
1A8	仅 Ly6G	与 RB6-8C5 存在干扰
HK1.4	仅 Ly6C	不阻断 RB6-8C5 结合

NIMP-R14、AL-21 等克隆在小鼠髓系研究中也有使用，具体特异性以各厂家数据表标注为准，建议在自身体系中先行验证。

五、三个最容易踩的实验「坑」

坑一：用「Gr-1⁺ 细胞」代指中性粒细胞

用 RB6-8C5 圈出来的 Gr-1⁺ 群体，是一个不折不扣的异质群体：里面有 Ly6G⁺ 粒细胞，也有 Ly6C^hi 单核细胞、pDC、部分嗜酸性粒细胞和淋巴细胞亚群。

建议：把中性粒细胞明确定义为 CD11b⁺Ly6G⁺（使用 1A8），并在方法学部分写明所用克隆。

坑二：用 RB6-8C5 做体内清除，然后据此下结论

这是最容易出问题、也最容易被审稿人追问的一环。经典对照实验（Daley 等，J Leukoc Biol，2008）给出了非常直观的数据：RB6-8C5 体内给药，会同时降低血中性粒细胞和 Gr-1⁺ 单核细胞；而 1A8 只降低中性粒细胞。

关键对照数据（内毒素血症模型）：RB6-8C5 预处理后，血浆 TNF-α 升高约 20 倍；1A8 预处理后升高约 4 倍。两者相差 5 倍，说明被 RB6-8C5 一并清掉的非中性粒细胞 Gr-1⁺ 群体，很可能参与了 TNF-α 反应的调控。另有研究报道，抗 Gr-1 抗体清除不能有效去除荷瘤小鼠肝脏中的 MDSC（Ma 等，J Leukoc Biol，2012）——说明同一抗体在不同组织中的清除效率并不一致。

建议：用 RB6-8C5 得到的表型，应描述为「清除 Gr-1⁺ 细胞」，而不是「清除中性粒细胞」；若研究目标确实是中性粒细胞，请选用 1A8。

坑三：忽略 Ly6C 表达的动态性与来源多样性

单核细胞进入组织后可发生 Ly6C^hi → Ly6C^lo 的表型转变，仅凭 Ly6C 强度判断「是不是同一群细胞」存在风险
Ly6C 也表达于 pDC、记忆性 CD8⁺ T 细胞与内皮细胞，多组织样本分析时需设置排除通道
MDSC 与常规单核细胞、中性粒细胞在表型上高度重叠，小鼠 M-MDSC 与炎症性单核细胞难以仅凭表面标志区分，功能抑制实验仍是不可或缺的判据

六、MDSC 的历史包袱，与人鼠之间的物种鸿沟

Gr-1 留下的「历史包袱」

小鼠 MDSC 最初的定义就是 CD11b⁺Gr-1⁺。这个沿用多年的表述，正是今天 Gr-1 混淆问题的源头之一。后续研究依据 Ly6G 与 Ly6C 的表达差异，把它拆成了两个主要亚群：

亚群	表型	形态与对应细胞
PMN-MDSC（多形核型）	CD11b⁺Ly6G⁺Ly6C^lo	与中性粒细胞相似
M-MDSC（单核型）	CD11b⁺Ly6G⁻Ly6C^hi	与单核细胞相似

人身上为什么找不到 Ly6G 和 Ly6C？

这是很多做人源研究的老师会遇到的疑问：人的中性粒细胞，为什么染不出 Ly6G？答案是：人基因组里根本没有 Ly6g、Ly6c1、Ly6c2 的直系同源基因。小鼠 15 号染色体上的 Ly6 亚簇（包括 Ly6a、Ly6c1、Ly6c2、Ly6g、Ly6f 等）被认为是两个物种分化之后、经基因复制产生的，在人基因组中没有对应基因。

小鼠 vs 人：标志物体系的鸿沟。人 MDSC 采用 CD11b、CD14、CD15、CD66b、HLA-DR、LOX-1 等标志组合定义；人单核细胞亚群依据 CD14 与 CD16 划分为经典（CD14⁺⁺CD16⁻）、中间型（CD14⁺⁺CD16⁺）、非经典（CD14⁺CD16⁺⁺）；人的 Ly6/uPAR 家族成员包括 CD59、CD177、GPIHBP1、LY6E 等，但基因定位与表达分布均与小鼠 Ly6G/Ly6C 不同。由此得到一条通用原则：小鼠体系中基于 Gr-1/Ly6G/Ly6C 得到的结论，不能直接外推到人。跨物种研究应当各用各的标志物体系，并在讨论中明确标注物种。

七、抗体选择、设门建议与分选方案

一张可直接用的设门表

目标细胞	推荐标志组合	备注
中性粒细胞	CD45⁺ CD11b⁺ Ly6G⁺（1A8）	不宜仅用 RB6-8C5 单独定义
单核细胞亚群	CD11b⁺ CD115⁺ Ly6C^hi / Ly6C^lo（HK1.4）	Ly6C^hi 为炎症型，Ly6C^lo 为巡逻型
PMN-MDSC / M-MDSC	CD11b⁺Ly6G⁺Ly6C^lo / CD11b⁺Ly6G⁻Ly6C^hi	需设置完整的排除通道
嗜酸性粒细胞排除	Siglec-F、CCR3	与 Ly6G/Ly6C 存在交叉表达
排除通道（dump channel）	CD3、CD19/B220、NK1.1、NKp46、CD11c、Siglec-F、CCR3	减少谱系混杂，提升亚群定义可靠性

染色与实验设计的五个要点

Ly6G、Ly6C 均为 GPI 锚定的表面抗原，适合活细胞表面染色，不涉及胞内段
明确报告抗体克隆与小鼠品系背景——Ly6C 在 T 细胞上的表达受单倍型影响，C57BL/6 与 BALB/c 数据不可直接比较
多色方案注意克隆间干扰：HK1.4 可与 RB6-8C5 共用，1A8 与 RB6-8C5 之间存在干扰
体内清除实验先明确目标细胞：清除中性粒细胞选 1A8；若用 RB6-8C5，结论应表述为「清除 Gr-1⁺ 细胞」
肝脏、肺脏等组织中的清除效率与非靶细胞混杂需单独验证，不宜直接沿用血液或脾脏的结论

分选与检测：没有最优方案，只有适配场景

在需要获得高纯度中性粒细胞、单核细胞或其亚群用于下游功能实验时，除流式分选（FACS）外，磁珠分选是常见的富集手段。不同方案适用于不同的应用场景：

流式分选（FACS）：可依据多参数设门定义目标群体，适用于需以多重表面标志组合严格定义亚群的研究
阴性分选（阴选）：通过去除非目标细胞获得目的细胞，不标记目的细胞表面分子，适用于对目的细胞表面标志完整性有特定要求的下游应用（例如后续仍需对 Ly6G、Ly6C 本身做定量染色）
阳性分选（阳选）：以目的细胞表面特异性标志直接捕获，流程简洁、纯度与得率稳定，适用于以目的细胞为直接研究对象的功能实验
有柱分选与无柱分选：两类磁珠分选方式分别适配不同的通量规模与设备条件

英诺思生物同时提供阴选与阳选、有柱与无柱分选的完整产品路线，各路线均不影响细胞后续功能，可根据下游应用场景选择相应方案。选择分选方案时，建议综合考量三项指标：分选纯度、细胞活性、与下游检测方案的兼容性。

结语

回到最初的问题：Gr-1、Ly6G 和 Ly6C 有什么区别？一句话总结——Gr-1 是抗体的名字，Ly6G 和 Ly6C 是分子的名字。前者的识别范围覆盖后两者，这正是所有混淆的起点。

对实验而言，真正重要的不是记住三个名词的定义，而是养成一个习惯：在方法学部分写清楚用的是哪一株抗体、圈的是哪一群细胞。用 RB6-8C5 就诚实地写「清除 Gr-1⁺ 细胞」，用 1A8 就明确地写「清除中性粒细胞」。这一个动作，往往就能避免审稿人一轮方法学追问。

从 Sca-1（Ly6A/E）到 Ly6G、Ly6C，这个家族在小鼠免疫学里已经「住」了几十年。它们的表达谱有重叠、有动态、还有品系差异——这也提醒我们，没有任何一个标志物是孤立可靠的，可靠的永远是标志物的组合与清晰的实验定义。

主要参考资料

Daley JM, et al. Use of Ly6G-specific monoclonal antibody to deplete neutrophils in mice. J Leukoc Biol. 2008;83(1):64-70. DOI: 10.1189/jlb.0407247
Loughner CL, et al. Organization, evolution and functions of the human and mouse Ly6/uPAR family genes. Hum Genomics. 2016;10:10. DOI: 10.1186/s40246-016-0074-2
Ma C, et al. Anti-Gr-1 antibody depletion fails to eliminate hepatic myeloid-derived suppressor cells in tumor-bearing mice. J Leukoc Biol. 2012;92(6):1199-1206.
Morimoto J, et al. No major impact of two homologous proteins Ly6C1 and Ly6C2 on immune homeostasis. Immunohorizons. 2022;6(3):202.
抗体特异性与表达谱信息引自各流式抗体厂家公开技术数据表。

文献卷期页码以各数据库检索结果为准；引用文献数据时请标注原始出处与实验条件。

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