在T细胞相关研究中，免疫细胞分选是多数实验流程的起始环节。分选所得细胞的纯度与活性，直接影响下游细胞毒性实验、单细胞测序及扩增培养的数据质量。
英诺思生物现正式推出人CD8阳选纳米磁珠试剂盒——PH008 anti-human CD8 Nanobeads。该产品与已上市的CD4（PH004）、CD34、CD19磁珠共同构成英诺思T细胞研究产品体系。
本文系统介绍CD8+ T细胞的生物学特性与主要应用方向，并阐述PH008的技术原理与验证数据。
一、CD8+ T淋巴细胞的生物学功能
CD8是一种分子量为32~34 kD的I型跨膜糖蛋白，属免疫球蛋白超家族成员。在细胞表面，CD8以两种二聚体形式存在：
| 形式 | 组成 | 主要表达细胞 |
|---|---|---|
| CD8α/α 同源二聚体 | α链同源 | 部分外周T细胞；绝大多数NK细胞 |
| CD8α/β 异源二聚体 | α链与β链 | MHC I类分子限制性T细胞（CTL前体及成熟CTL） |
CD8分子作为MHC I类分子限制性T细胞受体（TCR）的共受体，参与抗原识别与T细胞活化过程，并已被证实参与胸腺分化选择。
CD8+ 细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte, CTL）是适应性免疫应答的核心效应细胞，其主要功能包括：
- 靶向杀伤：通过穿孔素/颗粒酶通路及Fas/FasL通路清除病毒感染细胞与肿瘤细胞；
- 效应分子分泌：分泌IFN-γ、TNF-α等细胞因子，调控局部免疫应答；
- 免疫记忆形成：部分CTL分化为记忆性T细胞亚群，介导长期免疫监视。
在T细胞应答中，CD4+ T细胞主要发挥辅助调节功能，CD8+ T细胞承担细胞毒效应功能，二者共同构成T细胞研究的主要对象。
二、CD8+ T细胞的主要应用领域
CD8+ T细胞的独立研究价值日益凸显，目前主要应用于以下方向：
- 肿瘤免疫治疗研究：CAR-T、TCR-T、TIL及肿瘤抗原特异性CTL的培养与功能评价；
- 感染免疫研究：CMV、HIV、HBV等病毒特异性CD8+ T细胞应答分析；
- 自身免疫与移植免疫研究：CD8+ T细胞在移植物抗宿主病（GVHD）及自身免疫性疾病中的作用；
- 单细胞多组学研究：scRNA-seq、TCR-seq、ATAC-seq的高质量起始样本制备；
- 疫苗免疫原性评估：抗原特异性CD8+ T细胞的频数与功能检测。
三、CD8+ T细胞的分选需求与方案选择
以下数据引自PH008产品说明书中的PBMC验证实验：
这一构成比例决定了CD8+ T细胞需经分选富集方能满足多数下游应用的要求：
- 目标细胞占比有限。PBMC中半数以上细胞（CD4+ T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞等）并非目标群体。
- 多数下游实验对起始样本纯度有一定要求。以CD8+ T细胞为直接研究对象的细胞毒性实验、单细胞测序等应用，高纯度起始样本有助于简化结果判读与数据分析。
- 不同分离方案适用于不同应用场景：
- 流式分选（FACS）：可依据多参数设门定义目标群体，适用于需以多重表面标志组合定义细胞亚群的研究；
- 阴性分选（阴选）：通过去除非目标细胞获得目的细胞，不标记目的细胞表面分子，适用于对目的细胞表面标志完整性有特定要求的下游应用；
- 阳性分选（阳选）：以目的细胞表面特异性标志直接捕获，流程简洁、纯度与得率稳定，适用于以CD8+ T细胞为直接研究对象的功能实验；
- 有柱分选与无柱分选：两类磁珠分选方式分别适配不同的通量规模与设备条件。
- CD8分子在NK细胞表面亦有表达（NK细胞几乎仅表达CD8α/α同源二聚体），磁珠用量偏大时可能共分离部分NK细胞，对特异性要求较高的实验需注意磁珠用量的优化。
四、PH008 anti-human CD8 Nanobeads 产品概述
PH008 anti-human CD8 Nanobeads是英诺思生物人CD8阳选纳米磁珠试剂盒（有柱分选路线），技术原理如下：
- 采用anti-human CD8抗体直接偶联纳米级磁珠，抗体与磁珠一体化；
- 与PBMC样本于4°C孵育10 min，CD8+ 细胞即被磁珠标记；
- 样本上柱后置于磁场中，CD8+ 细胞被吸附滞留于分选柱内，其余细胞随重力流出；
- 将分选柱移出磁场，洗脱即得高纯度CD8+ 细胞，可直接用于流式细胞术检测、DNA/RNA提取及细胞功能实验等下游研究。
PH008 分选原理示意：从样本标记到有柱分选到获得靶细胞
试剂盒规格
| 货号 | 处理细胞数 | 规格 |
|---|---|---|
| PH008S | 1×10⁸ cells | 0.1 mL |
| PH008M | 5×10⁸ cells | 0.5 mL |
| PH008L | 1×10⁹ cells | 1 mL |
磁珠保存于PBS + 0.1% BSA缓冲液，4°C保存，避免冷冻。
配套耗材与仪器
| 项目 | 推荐配置 |
|---|---|
| 缓冲液 | FACS Buffer（1× PBS + 0.02% EDTA + 2% FBS），不建议使用纯PBS |
| 耗材 | 70 μm无菌尼龙滤网、分选柱 |
| 仪器 | 离心机、磁力架M1/M8或L1/L4 |
分选柱载量参考
| 分选柱 | 标记细胞数量 | 总细胞数量 | 平衡液 | 洗涤液（×3） |
|---|---|---|---|---|
| M分选柱 | <1×10⁷ | <2×10⁸ | 500 μL | 500 μL |
| L分选柱 | <1×10⁸ | <2×10⁹ | 3 mL | 3 mL |
五、PBMC样本验证数据
采用PH008对PBMC样本进行分离验证，结果如下：
| 检测指标 | 分选前 | 分选后 |
|---|---|---|
| CD3+ T细胞纯度 | 73.3% | 96.3% |
| CD8+ / CD3+ 比例 | 49.9% | 94.1% |
经一次分选，CD3+ T细胞纯度由73.3%提升至96.3%，CD8+ 细胞占CD3+ 细胞的比例由49.9%提升至94.1%。对应的流式细胞术检测结果：
PH008 PBMC 分选前后流式细胞术检测（Before separation 与 CD8 Enrichment）
六、产品核心优势
- 纳米级磁珠，抗体直接偶联：磁珠粒径小、结合温和，不占用抗原表位、不影响细胞后续功能，分选所得CD8+ T细胞可直接用于细胞毒性实验、激活扩增或单细胞测序。
- 高纯度分离：验证数据显示CD3+ T细胞纯度96.3%、CD8+ / CD3+ 比例94.1%，满足多数下游应用要求。
- 操作简便，流程可重复：4°C孵育10 min，操作流程规范清晰，适用于常规实验安排。
- 多规格覆盖不同实验规模：处理细胞数覆盖1×10⁸至1×10⁹，可衔接临床前工艺开发。
- 兼容主流有柱分选系统：适配磁力架M1/M8、L1/L4等主流分选设备。
- 国产自主研发：从纳米磁珠制备到anti-CD8抗体开发全程自主完成，批次间性能稳定，供货可控。
七、英诺思T细胞研究产品体系
PH008是英诺思T细胞研究产品体系的组成部分。配合以下产品，可构建完整的"分选—激活—增殖—功能验证"实验流程：
| 产品 | 用途 |
|---|---|
| PH004 anti-human CD4 Nanobeads | CD4+ T细胞分选 |
| CD34纳米磁珠 | HSPC分选（用于体外T细胞诱导分化） |
| CD19纳米磁珠 | B细胞分选（用于T/B细胞共培养研究） |
| AH2001 T细胞激活磁珠 | 分选后CD3+ 或CD8+ T细胞的激活与扩增 |
| EasyIso | 通用型细胞分选产品 |
| CAR-T工艺服务 / Treg诱导分化服务 | 工艺开发与体外诱导 |
整合上述产品，典型的实验流程为：
八、使用注意事项
依据产品说明书及内部验证经验，使用中需关注以下要点：
- CD8在NK细胞表面有表达：磁珠用量较多时可能共分离部分NK细胞。对特异性要求较高的实验，建议优化磁珠用量，或在分析阶段结合CD56设门排除。
- 分选后CD8呈连续性表达：与分选前相比，分选后CD8信号呈连续梯度分布，后续流式分析时应采用适宜的设门策略。
- 流式抗体染色需保证充足的抗体剂量：分选所得CD8+ 细胞纯度较高，单位体积内目标细胞数量显著高于分选前样本，进行流式抗体染色时应按细胞总数足量添加抗体，避免因抗体剂量不足影响染色效果与结果判读。
- 使用FACS Buffer而非PBS：PBS缺乏蛋白保护成分与渗透压缓冲能力，使用FACS Buffer（含2% FBS、0.02% EDTA）可维持免疫细胞的得率与活性。
- 本产品仅供科研使用（Research Use Only），不用于临床诊断或治疗。
九、联系与咨询
如需获取高纯度、状态良好的CD8+ T细胞用于相关研究，欢迎学术及工业用户通过联系我们页面咨询试用与技术方案，以及与CD4（PH004）、T细胞激活磁珠（AH2001）、CD34磁珠等产品的联合应用方案。PH008完整说明书、规格与COA可在官网"产品中心—有柱分选"类目下查看。