EasyIso™ mouse CD4 T cell isolation kits, Column-based (有柱阴选)

1. 阴选时，用FACS buffer洗涤分选柱，将未标记的的目的细胞充分洗脱；2 阳选时，加入3mL FACS buffer，用活塞快速推出阳选的细胞即可；3 一般情况不需要反复过柱，对应初始比例较低的细胞，单次分选纯度不高时，可以再过一次新的分选柱，可以有效提高纯度（例如human CD34, mouse CD11b和CD11C的分选）

不是，CD45 并非 “所有免疫细胞” 的标志物，而是所有白细胞（Leukocyte） 的特异性标志物

一、核心纠正：CD45 并非 “所有免疫细胞” 的标志物，而是所有白细胞（Leukocyte） 的特异性标志物
1. CD45 的表达范围（精准界定）
表达细胞：所有白细胞（淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、粒细胞、树突状细胞等）均表达 CD45（属于跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶，调控细胞活化信号）；
2. 不表达细胞：
非免疫细胞（红细胞、血小板、内皮细胞、实质细胞等）不表达 CD45；
少数特殊免疫相关细胞（如成熟红细胞前体、血小板前体巨核细胞）也不表达。

2. 关键区分：“免疫细胞”≠“白细胞”
免疫细胞是功能学概念（包括白细胞、自然杀伤细胞 NK、肥大细胞等，核心功能是免疫防御 / 监视 / 稳态）；
白细胞是形态学分类（血液中除红细胞、血小板外的细胞总称），二者高度重叠但并非完全等同，而 CD45 的表达严格限定于白细胞谱系（免疫细胞中不属于白细胞的亚型，如部分肥大细胞亚群，CD45 表达可阴性）

血液、脾脏、淋巴结等细胞亚群比例相对清晰的样本适用于阴选；其他组织里的免疫细胞群会有动态的变化，且比例通常低于5%，都推荐用阳选的

虽然 T 细胞都表达 CD3，但并不是所有 T 细胞都同时表达 CD4 和 CD8，成熟的 T 细胞只表达其中一种。CD3 T 细胞分选试剂盒、CD4 T 细胞分选试剂盒和 CD8 T 细胞分选试剂盒的区别主要在于以下几个方面：

分选原理：三种试剂盒通常都基于抗原 - 抗体特异性结合的原理，利用磁珠或荧光标记等方法来分选细胞。CD3 T 细胞分选试剂盒是针对所有表达 CD3 的 T 细胞，通过识别 CD3 抗原进行分选。CD4 T 细胞分选试剂盒则是特异性识别并结合 CD4 抗原，从而分离出表达 CD4 的 T 细胞亚群。CD8 T 细胞分选试剂盒同理，是通过识别 CD8 抗原，将表达 CD8 的 T 细胞分选出来。
分选细胞类型：
CD3 T 细胞分选试剂盒会将所有 T 细胞（包括 CD4+T 细胞、CD8+T 细胞等）都分选出来，因为所有 T 细胞表面均表达 CD3 分子。

CD4 T 细胞分选试剂盒主要用于分离辅助性 T 细胞（Th 细胞），它们在免疫反应中起辅助作用，可帮助激活 B 细胞、细胞毒性 T 细胞等。

CD8 T 细胞分选试剂盒主要用于分离细胞毒性 T 细胞（Tc 细胞）  Cytotoxic T cell，它们能够直接杀伤被病原体感染的细胞或肿瘤细胞等。

应用场景：
CD3 T 细胞分选试剂盒常用于需要研究整体 T 细胞功能或特性的实验，如研究 T 细胞在免疫应答中的总体作用等。
CD4 T 细胞分选试剂盒适用于研究与免疫辅助功能相关的课题，如探讨 Th 细胞亚群在过敏反应、自身免疫病中的作用等。
CD8 T 细胞分选试剂盒则更多应用于肿瘤免疫治疗研究，如评估细胞毒性 T 细胞对肿瘤细胞的杀伤能力，或用于 CAR - T 细胞疗法中制备针对肿瘤细胞的特异性杀伤细胞等。

英诺思生物细胞分选试剂盒分成大中小三个规格，最大上样量是1e+9，5e+8，1e+8，具体分选剂量查看对应的货号。能够得到多少细胞主要看目的细胞的占比，比例越高，得到的细胞数量越多。一般而言，阴选试剂盒的得率低于阳选试剂盒。

小鼠C57B6/L或者BalB/C都可以的，一般没有年龄要求，但是推荐6-8周，小鼠比较年轻，性别没有要求（正常我们用的B6背景，一般选6-8周(如果要培养扩增)，性别无明显差异）
C57BL/6（B6）= 细胞免疫 / Th1/CD8 杀伤 / 肿瘤 / 基因编辑标准小鼠；
BALB/c = 体液免疫 / Th2 / 过敏 / 抗体制备专用小鼠；
若你实验是小鼠 naive CD8 T 体外活化、CFSE 增殖、IL-2/7/15 联合扩增，优先使用 C57BL/6

人PBMC：T细胞60-70%(CD4 30-40%,CD8 15-25%)，B细胞5-15%，NK 5-10%，单核细胞10-20%，DC 0.5-2%。小鼠脾脏(C57BL/6)：B细胞50-65%，T细胞20-35%(CD4 15-25%,CD8 8-15%)，NK 1-2%，DC 1-3%。比例因个体、年龄、品系而异。

无钙镁 PBS 提供渗透压与 pH；BSA/FBS 防吸附、封闭 Fc、保护细胞；EDTA 螯合离子打散细胞团，三者搭配实现高纯度、高活率免疫细胞阴性分选。
EISO0500配方: NaCI136.89 mM; KCI 2.67 mM; Na2HPO4 8.1 mM; KH2PO4 1.76 mM; FBS 2%; EDTA 0.02%

阴选是将非目前细胞去除，得到的目的细胞里不含有磁珠；阳选是通过磁珠将目的细胞拉出来，会含有磁珠。英诺思生物阳选产品里的磁珠粒径非常小，约50nm，对细胞功能没有影响，回输小鼠也不会造成伤害