EasyTune™ 小鼠 Th1/Th2 细胞诱导分化试剂盒（DM102/DM103）：CD4⁺IFN-γ⁺ 50.7%、CD4⁺IL-4⁺ 18.0%

Q: EasyTune™ 小鼠 Th1/Th2 诱导分化试剂盒包含哪些组分？

DM102（小鼠 Th1）包含 Human IL-2（CTK301）、Mouse IL-12（CTK412）与 Anti-mouse IL-4 Antibody（AB2508）；DM103（小鼠 Th2）包含 Human IL-2（CTK301）、Mouse IL-4（CTK402）与 Anti-mouse IFNγ Antibody（AB2509）。两套试剂盒均为单规格包装，运输条件为 4 °C。

核心信息

DM102（EasyTune™ 小鼠 Th1 细胞诱导分化试剂盒）与 DM103（EasyTune™ 小鼠 Th2 细胞诱导分化试剂盒）分别以 IL-2 + IL-12 + 抗 IL-4 中和抗体、IL-2 + IL-4 + 抗 IFNγ 中和抗体组合，将小鼠 naive CD4⁺ T 细胞诱导为 Th1 与 Th2 亚群。

小鼠脾脏 naive CD4⁺ T 细胞验证（C57BL/6J，48 孔板诱导 5 天，破膜染色）：DM102 诱导后 CD4⁺IFN-γ⁺ 为 50.7%（未诱导对照 0.010%）；DM103 诱导后 CD4⁺IL-4⁺ 为 18.0%（未诱导对照 0.76%）。

一、Th1 与 Th2：CD4⁺ T 细胞的两条极化分支

naive CD4⁺ T 细胞被抗原激活后，并不只有一种结局。在抗原提呈细胞提供的信号之外，局部细胞因子环境决定了它将走向哪条谱系：IL-12 与 IFN-γ 推动 Th1 极化，IL-4 推动 Th2 极化。两条分支一旦确立，还会通过各自分泌的效应因子相互抑制，形成稳定的极化状态。

Th1

关键转录因子：T-bet（Tbx21）

标志细胞因子：IFN-γ、TNF-α、IL-2

效应方向：激活巨噬细胞、促进 IgG 类转换、增强细胞毒性 T 细胞与 NK 细胞应答；在抗胞内病原体感染中起主导作用。

Th2

关键转录因子：GATA-3

标志细胞因子：IL-4、IL-5、IL-13

效应方向：辅助 B 细胞产生抗体、招募嗜酸性粒细胞与肥大细胞；在抗寄生虫感染与过敏相关应答中起主导作用。

两条分支的相互抑制是极化实验的关键约束：诱导 Th1 时必须中和 IL-4，诱导 Th2 时必须中和 IFN-γ。否则内源产生的反向效应因子会把细胞拉向另一侧，导致目的亚群比例明显偏低。

二、Th1 / Th2 极化研究的应用领域

免疫应答机制研究——Th1/Th2 平衡在自身免疫病、过敏与移植免疫中的作用机制；
感染免疫——宿主对不同病原体的极化偏向及其与疾病转归的关系；
肿瘤免疫——肿瘤微环境中 Th1 型应答与免疫治疗响应的相关性；
药物与化合物筛选——以 Th1/Th2 极化比例作为免疫调节活性评价终点；
细胞治疗与体外模型——Th1 / Th2 细胞与巨噬细胞、B 细胞共培养构建功能模型；
教学与技能训练——CD4⁺ T 细胞分选、激活、诱导分化与胞内染色的完整实验链路。

三、体外诱导分化的实验设计要点

影响极化效率的变量比想象中多。以下几点是实验设计时最容易出偏差的环节：

起始细胞纯度naive CD4⁺ T 细胞在起始群体中的比例直接决定上限。若混杂了记忆 T 细胞或 CD8⁺ T 细胞，目的亚群比例会被稀释。建议以阴选方式获得 naive CD4⁺ T 细胞，纯度稳定、细胞状态好，且不受磁珠残留影响。

小鼠状态饲养环境较差或处于炎症模型中的小鼠，体内 naive CD4⁺ T 细胞比例偏低。建议选用健康 SPF 环境中的小鼠取材。

激活强度CD3/CD28 激活磁珠提供信号 1 与信号 2。磁珠用量不足会导致激活不完全，过量则可能造成过度活化与细胞状态下降，应按说明书推荐剂量加入。

细胞因子与中和抗体组合这是决定极化方向的核心变量。两条分支所需的组合不同，且必须现配现用，细胞因子反复冻融会显著影响活性。

诱导时长按 5 天诱导观察，多数样本可获得稳定的极化比例。时长不足会导致部分细胞尚未完成极化。

四、EasyTune™ 小鼠 Th1/Th2 诱导分化试剂盒产品概述

EasyTune™ 小鼠 Th1 细胞诱导分化试剂盒（DM102）与 Th2 细胞诱导分化试剂盒（DM103）为两套独立产品，各自包含经过免疫功能验证的细胞因子与中和抗体组合，可用于研究小鼠初始 T 细胞的分化调控与 Th1/Th2 功能，并建立体外扩增与亚群极化的实验方案。

试剂盒组分

表 1　DM102（小鼠 Th1）试剂盒组分

产品名称	规格	子货号	保存条件	功能
Human IL-2	10 μg	`CTK301`	-80 °C	激活小鼠 IL-2 受体
Mouse IL-12	10 μg	`CTK412`	-80 °C	激活小鼠 IL-12 受体
Anti-mouse IL-4 Antibody	1 mL	`AB2508`	4 °C	阻断 IL-4 的功能

运输条件：4 °C 运输。诱导 Th1 分化时，IL-2 与 IL-12 在培养基中按 1:1000 稀释（终浓度 10 ng/mL 与 20 ng/mL），anti-mouse IL-4 中和抗体按 1:100 加入。

表 2　DM103（小鼠 Th2）试剂盒组分

产品名称	规格	子货号	保存条件	功能
Human IL-2	10 μg	`CTK301`	-80 °C	激活小鼠 IL-2 受体
Mouse IL-4	10 μg	`CTK402`	-80 °C	激活小鼠 IL-4 受体
Anti-mouse IFNγ Antibody	1 mL	`AB2509`	4 °C	阻断 IFNγ 的功能

运输条件：4 °C 运输。诱导 Th2 分化时，IL-2 与 IL-4 在培养基中按 1:1000 稀释（终浓度 10 ng/mL 与 80 ng/mL），anti-mouse IFNγ 中和抗体按 1:100 加入。

两套试剂盒均为单规格包装，共用 Human IL-2（CTK301）组分，区别在于极化因子与中和抗体：DM102 为 Mouse IL-12 + 抗 IL-4，DM103 为 Mouse IL-4 + 抗 IFNγ。

试剂预制备

表 3　细胞因子溶解与终浓度

试剂盒	组分解法	母液浓度	培养基中稀释比	工作终浓度
DM102	10 μg human IL-2 溶于 1 mL PBS	10 ng/μL	1:1000	10 ng/mL
DM102	10 μg mouse IL-12 溶于 0.5 mL PBS	20 ng/μL	1:1000	20 ng/mL
DM103	10 μg human IL-2 溶于 1 mL PBS	10 ng/μL	1:1000	10 ng/mL
DM103	10 μg mouse IL-4 溶于 125 μL PBS	80 ng/μL	1:1000	80 ng/mL

溶解后分装冻存于 -80 °C，避免反复冻融。以 10 mL 培养基为例：加入 10 μL IL-2、10 μL 极化细胞因子（IL-12 或 IL-4）与 100 μL 中和抗体，配成含细胞因子与抗体的完全培养基，现配现用。

诱导分化流程概要

表 4　诱导分化操作流程（48 孔板）

步骤	操作说明	剂量与时间
1	从小鼠脾脏分选得到 naive CD4⁺ T 细胞并计数	—
2	用含细胞因子与中和抗体的 T 淋巴细胞培养基重悬细胞	终浓度 5 × 10⁵ cells/mL
3	取适量体积细胞加入孔板	600 μL / 孔
4	混匀并加入小鼠 CD3/CD28 T 细胞激活磁珠	7.5 μL / 孔
5	激活 48–72 h 后换液并分孔：收集细胞，400 g 离心 5 min，去上清后用完全培养基重悬，铺到 24 孔板	1.2 mL / 孔；无需更换激活磁珠，只换液
6	收集细胞，染色鉴定	诱导第 5 天流式鉴定

流式鉴定流程

表 5　胞内细胞因子染色（以 DM102 / Th1 为例）

步骤	操作说明
1	加入 PMA（1 μM）+ Ionomycin（5 μM），37 °C 培养 1 h
2	加入 Brefeldin A（10 μg/mL）刺激 4–5 h
3	表面染色：抗 CD4 抗体，4 °C 避光孵育 30 min
4	固定破膜（使用固定/破膜试剂盒，按试剂盒说明操作）
5	胞内染色：抗 IFN-γ 抗体，4 °C 避光孵育 30 min
6	流式细胞仪检测：鉴定 CD4⁺IFN-γ⁺
7	流式分析

DM103（Th2）流程相同，第 5 步改为抗 IL-4 抗体，检测指标为 CD4⁺IL-4⁺。注：破膜固定后的细胞需调高离心转速以降低细胞损失；Th2 染色中 CD4 可能出现内吞，应适当增加抗 CD4 流式抗体的剂量。

五、小鼠脾脏 naive CD4⁺ T 细胞验证数据

以 C57BL/6J 小鼠脾脏来源的 naive CD4⁺ T 细胞为起始细胞，重悬于小鼠 T 淋巴细胞培养基后铺至 48 孔平底板，加入小鼠 CD3/CD28 T 细胞激活磁珠与相应诱导分化试剂盒，诱导 5 天后进行胞内染色与流式分析。结果如下：

表 6　诱导前后目的亚群比例（说明书内嵌流式数据）

试剂盒	检测指标	未诱导对照	诱导后	样本与条件
DM102（Th1）	CD4⁺IFN-γ⁺	0.010%	50.7%	C57BL/6J 小鼠脾脏 naive CD4⁺ T 细胞；48 孔板；CD3/CD28 激活磁珠；诱导 5 天；破膜染色
DM103（Th2）	CD4⁺IL-4⁺	0.76%	18.0%	同上

数据来源：DM102 / DM103 产品说明书（Version 26.01）内嵌流式图，门内数字为 CD4⁺ 细胞中 IFN-γ⁺ 或 IL-4⁺ 的百分比。未诱导对照即同期培养但未加入诱导分化试剂盒的细胞。

值得说明的是，Th1 与 Th2 两条分支的诱导效率本身就不对等。Th2 极化在体外通常比 Th1 更慢、比例更低，这与 GATA-3 通路的激活动力学以及 IL-4 的自分泌放大需要时间有关。因此评估 Th2 诱导效果时，应以「未诱导对照 0.76% → 诱导后 18.0%」的相对倍数为主，而非绝对百分比。

六、产品核心优势

组合经过免疫功能验证——细胞因子与中和抗体按比例预配为组合，无需自行筛选极化因子搭配；
两套体系互为对照——DM102 与 DM103 共用 Human IL-2 组分、仅极化因子与中和抗体不同，便于同批实验内比较两条极化分支；
流程与配套产品对齐——分选、培养、激活、诱导各环节均有对应产品衔接，避免方法学拼凑带来的变量；
说明书步骤可直接落地——含溶解浓度、稀释比、铺板体积、磁珠用量、换液时间点与染色步骤的完整参数；
单规格包装，无需选档——一套试剂盒覆盖标准诱导实验用量，减少选型成本。

七、EasyTune™ 增殖分化套装产品体系

EasyTune™ 系列覆盖小鼠 CD4⁺ T 细胞的三个主要极化去向，可按研究目标选用：

表 7　EasyTune™ 诱导分化试剂盒产品体系

货号	产品名称	诱导方向	组分	检测指标
`DM101`	EasyTune™ 小鼠 Treg 细胞诱导分化试剂盒	Treg	CTK301、CTK302	CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺
`DM102`	EasyTune™ 小鼠 Th1 细胞诱导分化试剂盒	Th1	CTK301、CTK412、AB2508	CD4⁺IFN-γ⁺
`DM103`	EasyTune™ 小鼠 Th2 细胞诱导分化试剂盒	Th2	CTK301、CTK402、AB2509	CD4⁺IL-4⁺

三款试剂盒均面向小鼠脾脏来源的 naive CD4⁺ T 细胞，按对应极化体系诱导后以胞内染色或核内染色鉴定。

八、配套产品与耗材

表 8　推荐配套产品

环节	产品	货号
naive CD4⁺ T 细胞分选	EasyIso™ 小鼠 naive CD4 T 细胞分选试剂盒（阴选）	`SN4104`
细胞分选缓冲液	EasyIso™ 细胞分选缓冲液 / FACS Buffer	`EISO0500`
T 细胞激活	ActBeads™ 小鼠 T 细胞激活磁珠（CD3/CD28）	`AM2001`
细胞培养	小鼠 T 淋巴细胞培养基（含血清）	`C400100`

说明书推荐：样品制备配合 SN4104 与 EISO0500；细胞培养配合 C400100 与 AM2001。

完整实验链路：EasyIso™ 阴选获得 naive CD4⁺ T 细胞（SN4104）→ 分选缓冲液保障活率（EISO0500）→ 小鼠 T 淋巴细胞培养基重悬（C400100）→ CD3/CD28 激活磁珠激活（AM2001）→ 加入 EasyTune™ 诱导分化试剂盒（DM102 / DM103）→ 诱导 5 天 → 破膜染色流式鉴定。

九、使用注意事项

细胞因子溶解后建议分装冻存于 -80 °C，避免反复冻融导致活性下降；
含细胞因子与中和抗体的完全培养基应现配现用，不宜久置；
全程无菌操作，谨防污染；
分选与培养环节建议使用品质稳定的分选缓冲液，缓冲液品质对细胞活率影响较大；
选用健康 SPF 环境中的小鼠取材，炎症模型或饲养条件较差的小鼠 naive CD4⁺ T 细胞比例偏低；
换液分孔步骤不需要更换 T 细胞激活磁珠，仅换液即可；
破膜固定后的细胞需调高离心转速，以降低细胞损失；
Th2 染色中 CD4 可能出现内吞，应适当增加抗 CD4 流式抗体剂量；
本产品仅供科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗。

十、常见问题

Th1 和 Th2 细胞有什么区别？

Th1 与 Th2 是两条 CD4⁺ 辅助性 T 细胞的极化分支：Th1 以转录因子 T-bet 为标志，分泌 IFN-γ、TNF-α、IL-2，参与细胞免疫与巨噬细胞激活；Th2 以转录因子 GATA-3 为标志，分泌 IL-4、IL-5、IL-13，参与体液免疫、嗜酸性粒细胞与肥大细胞相关应答。两者由共同的 naive CD4⁺ T 细胞在不同细胞因子环境下分化而来，并相互抑制。

EasyTune™ 小鼠 Th1/Th2 诱导分化试剂盒包含哪些组分？

DM102（小鼠 Th1）包含 Human IL-2（CTK301）、Mouse IL-12（CTK412）与 Anti-mouse IL-4 Antibody（AB2508）；DM103（小鼠 Th2）包含 Human IL-2（CTK301）、Mouse IL-4（CTK402）与 Anti-mouse IFNγ Antibody（AB2509）。两套试剂盒均为单规格包装，运输条件为 4 °C。

诱导分化需要多长时间？

按说明书流程，小鼠 naive CD4⁺ T 细胞铺板并加入激活磁珠后，于 48–72 小时之间换液并分孔，培养 5 天后收集细胞进行流式鉴定。

为什么必须用破膜染色检测 IFN-γ 和 IL-4？

IFN-γ 与 IL-4 属于分泌型细胞因子，在细胞内合成后经高尔基体分泌到细胞外，不在细胞表面表达。检测时需先以 PMA / Ionomycin 与 Brefeldin A 阻断分泌，使细胞因子在胞内蓄积，再经固定破膜后用抗 IFN-γ 或抗 IL-4 抗体进行胞内染色。表面染色（如抗 CD4）与胞内染色需分步进行，破膜后的细胞应适当调高离心转速以减少损失。

诱导后 Th1 或 Th2 的阳性比例大概是多少？

以小鼠脾脏来源的 naive CD4⁺ T 细胞为例（C57BL/6J，48 孔板，诱导 5 天，破膜染色）：DM102 诱导后 CD4⁺IFN-γ⁺ 为 50.7%，同期未诱导对照为 0.010%；DM103 诱导后 CD4⁺IL-4⁺ 为 18.0%，同期未诱导对照为 0.76%。阳性比例受小鼠品系、饲养环境、naive CD4⁺ T 细胞分选纯度与激活强度影响，起始细胞中 naive 亚群比例较低会直接拉低最终极化效率。

诱导分化的细胞还能继续做下游实验吗？

可以。诱导后的 Th1 / Th2 细胞可用于细胞因子分泌检测、转录因子（T-bet / GATA-3）表达分析、与巨噬细胞或 B 细胞的共培养模型，以及 Th1/Th2 平衡相关机制研究。若下游需进行流式表型分析，培养体系中残留的 CD3/CD28 激活磁珠所偶联抗体会占据 CD3/CD28 表位，此时应改用其他克隆号的检测抗体。

十一、咨询与获取支持

如需 DM102 / DM103 的技术资料、实验方案建议或试用申请，欢迎通过官网「联系我们」或 product@eynoslifescience.com 与我们沟通。我们的技术团队可协助您评估起始细胞方案、极化条件与流式鉴定策略。

附：主要参考文献

Mosmann TR, Coffman RL. TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annual Review of Immunology. 1989;7:145-173.
Szabo SJ, Kim ST, Costa GL, Zhang X, Fathman CG, Glimcher LH. A novel transcription factor, T-bet, directs Th1 lineage commitment. Cell. 2000;100(6):655-669.
Zhu J, Paul WE. CD4 T cells: fates, functions, and faults. Blood. 2008;112(5):1557-1569.
Luckheeram RV, Zhou R, Verma AD, Xia B. CD4⁺T cells: differentiation and functions. Clinical and Developmental Immunology. 2012;2012:925135.