做细胞分选的实验里，总有几个问题会反复出现。下面这 7 个问题来自日常技术支持与用户交流——有的是拿到样本前的估算，有的是分选结束后判断数据时的疑惑，还有几个发生在下游基因操作环节。我们一并整理成文，希望能帮您省下一次试错。
样本量级：小鼠脾脏、小鼠骨髓、人 PBMC，各能拿到多少细胞。
分选质量：表位占位会不会影响流式、得率怎么算、Buffer 为什么不能省。
下游操作：小鼠 T 细胞的基因操作、病毒转导时激活磁珠要不要去掉。
本页目录
1小鼠脾脏有多少细胞？小鼠骨髓有多少细胞？
答小鼠脾脏细胞数约为 0.5–1×10⁸；一只小鼠两根股骨的骨髓细胞总数约 4~6×10⁷。细胞数量会随品系与周龄变化，但一般不会出现数量级上的差异。
21 mL 血液大约可以提取出多少 PBMC？
答1 mL 外周血约可获得 1×10⁶~2×10⁶ 个 PBMC；实际得量与白细胞计数、抗凝方式有关。
3英诺思阳选磁珠会不会封闭抗原表位？会影响后续流式分析吗？
答不会封闭抗原表位，也不影响后续流式染色。英诺思阳选磁珠粒径约 50 nm，只会占据细胞约 20%~30% 的抗原表位，因此分选后不需要选择特殊的抗体克隆号，可直接进行流式染色与表型分析。
4细胞得率是怎么计算的？
答得率的计算方式为：
得率 =（分选后细胞数 × 纯度）÷（分选前细胞数 × 目的细胞占比）× 100%
公式的分母是「分选前样本中目的细胞的绝对数」，而不是分选前的总细胞数。
5如何在小鼠 T 细胞里过表达或敲低基因？
答先用 anti-CD3/CD28 激活磁珠对小鼠 T 细胞做预激活，再用逆转录病毒转导 T 细胞；常规慢病毒对小鼠 T 细胞的感染效率很低，一般不适用。
6为什么分选 Buffer 对细胞分选很重要？
答分选 Buffer 的核心成分是 PBS。英诺思实测发现，市面上很多 PBS 对免疫细胞并不友好——浸泡脾脏单细胞悬液 30 分钟后，细胞活率会低至 50%。用劣质 PBS 配制的分选 Buffer 会影响细胞后续功能实验，如 T 细胞增殖、T 细胞分化、巨噬细胞分化等。
7病毒感染时，T 细胞激活磁珠要去除吗？
答通常不需要。激活状态不影响病毒转导，激活磁珠可以保留在培养体系中。
结语
下一期我们将继续整理分选柱选择、磁珠用量与细胞解离相关的常见问题。如果您有想了解的问题，欢迎通过官网「联系我们」与我们交流。
主要参考资料
Lambert JF, Carlson JE, Colvin GA, Quesenberry PJ. Evaluation of mouse whole body bone marrow cellularity and distribution of hematopoietic progenitors. Experimental Hematology. 2000;28(12):1493. DOI: 10.1016/S0301-472X(00)00629-9（BALB/c 小鼠全骨骼骨髓约 5.25×10⁸ 个细胞）
Duriancik DM, Hoag KA. The identification and enumeration of dendritic cell populations from individual mouse spleen and Peyer's patches using flow cytometric analysis. Cytometry Part A. 2009;75(11):951-959. DOI: 10.1002/cyto.a.20794（C57BL/6J 小鼠脾脏有核细胞约 1.2~1.4×10⁸）
Liu X, Quan N. Immune Cell Isolation from Mouse Femur Bone Marrow. Bio-protocol. 2015. DOI: 10.21769/bioprotoc.1631（小鼠股骨骨髓细胞产出）
JDRF nPOD. Isolation of Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC). 标准操作程序（健康供者每毫升全血约 1~2×10⁶ 个 PBMC）
英诺思生物. 阳选纳米磁珠、T 细胞激活磁珠与细胞分选缓冲液产品说明书（PH / PM 系列、AH2001、AM2001、EISO0500）